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genetica:wgs

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genetica:wgs [2020/05/19 11:42]
osotolongo [Parsing]
genetica:wgs [2020/06/02 10:25]
osotolongo [Whole Genome Sequencing]
Line 3: Line 3:
 El objetivo es definir un procedimiento que procese un numero grande de secuencias WGS en el menor tiempo posible. Para ello,una vez definido el pipeline deberemos automatizar las tareas e integrarlas en el schedule manager del cluster ([[:cluster|Como usar el cluster sin morir en el intento]]).  El objetivo es definir un procedimiento que procese un numero grande de secuencias WGS en el menor tiempo posible. Para ello,una vez definido el pipeline deberemos automatizar las tareas e integrarlas en el schedule manager del cluster ([[:cluster|Como usar el cluster sin morir en el intento]]). 
  
 +** Nota: Aunque el script de ejecución final está integrado en el cluster de Fundació ACE, puede ser modificado fácilmente para integrarlo en cualquier otro cluster que use [[https://slurm.schedmd.com/|SLURM]] y probablemente pueda modificarse para otros //schedule managers//. **
 ===== tl;dr ===== ===== tl;dr =====
 <code> <code>
Line 207: Line 208:
 </code> </code>
  
-<code>+<code perl>
         $orderfile = $outdir.'/validate_'.$pollo.'.sh';         $orderfile = $outdir.'/validate_'.$pollo.'.sh';
         open ORD, ">$orderfile";         open ORD, ">$orderfile";
Line 471: Line 472:
 ===== Ejecucion ===== ===== Ejecucion =====
  
 +La forma correcta de ejecutar el script es,
 +
 +<code>
 +$ ./wgs.pl -o /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE/
 +</code>
 +
 +La opción //-o// indica al script donde guardar los resultados, en este caso en // /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS //. Los datos se leeran desde ///the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE/ //,
 +
 +La opcion //-o// no es obligatoria. En caso de no suministrar un directorio de salida, esta se escribira en el directorio actual desde donde se ejeuta el script.
 +
 +Los resultados se escriben en el directorio de salida, haciendo un subdirectorio para cada sujeto analizado y siguiendo las mismas convenciones del //input//,
 +
 +<code>
 +[osotolongo@brick03 WGS]$ ls /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS
 +seq-1 seq-11 seq-13 seq-15 seq-17 seq-19 seq-20 seq-22 seq-24 seq-26 seq-28 seq-4  seq-6  seq-8  slurm
 +seq-10 seq-12 seq-14 seq-16 seq-18 seq-2 seq-21 seq-23 seq-25 seq-27 seq-3 seq-5  seq-7  seq-9
 +</code>
 +
 +Dentro de cada sujeto se crea u n directorio //results// con los resultados del analisis,
 +
 +<code bash>
 +[osotolongo@brick03 WGS]$ tree seq-1
 +seq-1
 +└── results
 +    ├── seq1_AnalyzeCovariates.pdf
 +    ├── seq1_before-after-plots.pdf
 +    ├── seq1_eval.gatkreport
 +    ├── seq1_exome_coverage.sample_statistics
 +    ├── seq1_exome_coverage.sample_summary
 +    ├── seq1_metrics.txt
 +    ├── seq1_raw.snps.indels.g.vcf.gz
 +    ├── seq1_raw.snps.indels.g.vcf.gz.tbi
 +    ├── seq1_recal.bai
 +    ├── seq1_recal.bam
 +    ├── seq1_recal_data.table1
 +    ├── seq1_recal_data.table2
 +    ├── seq1_verifybam.depthSM
 +    ├── seq1_verifybam.log
 +    └── seq1_verifybam.selfSM
 +
 +1 directory, 15 files
 +</code>
 +
 +----
 +=== trick ===
 +Esta estructura permitiria ejecutar, 
 +<code>
 +$ ./wgs.pl -o /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE
 +</code>
 + y **en caso de no tener problemas con los permisos**, los resultados quedarian en un directorio dentro del mismo sujeto de proyecto. No se ha hecho asi por defecto previendo precisamente los problemas de permisos.
 +----
  
 ===== Troubleshooting ===== ===== Troubleshooting =====
 +Pueden ocurrir multitud de problemas en la ejecucion del script. Afortunadamente un fallo en uno de las tareas afecta solamente al sujeto individual sobre el que se realiza la tarea. El resto de sujetos se procesara correctamente.
 +
 +Al ocurrir un fallo en algun script, el sistema enviara un email informando del fallo y el //jobid// asociado. Toda la informacion ira en el //subject// del email. 
 +
 +==== ejemplo 1 ====
 +Aqui se informa que la tarea con //jobid = 154540// ha fallado. Tambien sabemos que esta relacionada con el sujeto //seq-27//
 +
 +<code>
 +SLURM Job_id=154540 Name=sam_seq-27 Failed, Run time 00:28:28, FAILED, ExitCode 1
 +</code>
 +
 +Ahora, dentro del directorio de output se crea un directorio llamado //slurm// donde se guardan todos los logs de ejecucion de las tareas. Hemos de buscar este fallo en particular por el //jobid//,
 +
 +<code>
 +[osotolongo@brick03 WGS]$ ls slurm/ | grep 154540
 +bwa_seq-27-154540
 +</code>
 +
 +una vez localizado el //log// correcto podeos buscar el error manualmente,
 +
 +<code>
 +[osotolongo@brick03 WGS]$ less slurm/bwa_seq-27-154540
 +</code>
 +
 +o simplemente hacer algun grep,
 +<code>
 +[osotolongo@brick03 WGS]$ grep -i error slurm/bwa_seq-27-154540
 +[gzread] Input/output error
 +</code>
 +
 +Como informacion adicional, en el directorio slurm tambien se guardan los scripts a ejecutar para cada parte del proceso,
 + 
 +<code bash>
 +[osotolongo@brick03 WGS]$ ls slurm/ | grep seq-27 | grep sh
 +bwa_seq-27_0.sh
 +bwa_seq-27_1.sh
 +bwa_seq-27_2.sh
 +bwa_seq-27_3.sh
 +merge_seq-27.sh
 +validate_seq-27.sh
 +verify_seq-27.sh
 +</code>
 +
 +El nombre del log nos dice que ha fallado alguno de los //bwa//. En caso de querer depurar mas lo que ha pasado podemos leer el log y encontrar cual de los comandos ha fallado exactamente. 
 +
 +==== ejemplo 2 ====
 +
 +Algo menos basico, recibimos un email con subject,
 +
 +<code>
 +SLURM Job_id=154595 Name=validate_seq-8 Failed, Run time 01:01:18, FAILED, ExitCode 2
 +</code>
 +
 +y buscamos el log correspondiente,
 +
 +<code>
 +[osotolongo@brick03 WGS]$ ls slurm/ | grep 154595
 +validate_seq-8-154595
 +</code>
 +
 +Aqui si hacemos,
 +<code>
 +[osotolongo@brick03 WGS]$ grep -i error slurm/validate_seq-8-154595
 +</code>
 +
 +obtenemos un monton de informacion ya que el error ocurrio a un nivel y todos los niveles posteriores arrojan errores. Asi que no hay mas remediio que leerse el log con calma, y vemos que mientras se hace **MarkDuplicates** tenemos un error de //Java//,
 +<code>
 +Exception in thread "main" picard.PicardException: Exception writing ReadEnds to file.
 +        at picard.sam.markduplicates.util.ReadEndsForMarkDuplicatesCodec.decode(ReadEndsForMarkDuplicatesCodec.java:110)
 +        at picard.sam.markduplicates.util.ReadEndsForMarkDuplicatesCodec.decode(ReadEndsForMarkDuplicatesCodec.java:32)
 +        at htsjdk.samtools.util.SortingCollection$FileRecordIterator.advance(SortingCollection.java:630)
 +        at htsjdk.samtools.util.SortingCollection$FileRecordIterator.next(SortingCollection.java:620)
 +        at htsjdk.samtools.util.PeekIterator.peek(PeekIterator.java:69)
 +        at htsjdk.samtools.util.SortingCollection$PeekFileRecordIteratorComparator.compare(SortingCollection.java:655)
 +        at htsjdk.samtools.util.SortingCollection$PeekFileRecordIteratorComparator.compare(SortingCollection.java:652)
 +        at java.util.TreeMap.compare(TreeMap.java:1295)
 +        at java.util.TreeMap.put(TreeMap.java:538)
 +        at java.util.TreeSet.add(TreeSet.java:255)
 +        at htsjdk.samtools.util.SortingCollection$MergingIterator.next(SortingCollection.java:566)
 +        at picard.sam.markduplicates.MarkDuplicates.generateDuplicateIndexes(MarkDuplicates.java:729)
 +        at picard.sam.markduplicates.MarkDuplicates.doWork(MarkDuplicates.java:259)
 +        at picard.cmdline.CommandLineProgram.instanceMain(CommandLineProgram.java:305)
 +        at picard.cmdline.PicardCommandLine.instanceMain(PicardCommandLine.java:103)
 +        at picard.cmdline.PicardCommandLine.main(PicardCommandLine.java:113)
 +Caused by: java.io.IOException: failed to read chunk
 +        at org.xerial.snappy.SnappyInputStream.hasNextChunk(SnappyInputStream.java:433)
 +        at org.xerial.snappy.SnappyInputStream.read(SnappyInputStream.java:167)
 +        at java.io.DataInputStream.readFully(DataInputStream.java:195)
 +        at java.io.DataInputStream.readLong(DataInputStream.java:416)
 +        at picard.sam.markduplicates.util.ReadEndsForMarkDuplicatesCodec.decode(ReadEndsForMarkDuplicatesCodec.java:92)
 +        ... 15 more
 +</code>
 +Este error desencadena todos los demas errores.
 +
 +Dado que sabemos que este log corresponde al script //validate_seq-8.sh// podemos encontrar rapidamente el comando culpable del error,
 +
 +<code>
 +[osotolongo@brick03 WGS]$ grep MarkDuplicates slurm/validate_seq-8.sh
 +java -Djava.io.tmpdir=/nas/osotolongo/tmp/ -Xmx8g -jar /nas/usr/local/bin/picard.jar MarkDuplicates I=/the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-8/tmp/seq8_sorted.bam O=/the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-8/tmp/seq8_GATKready.bam METRICS_FILE=/the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-8/tmp/seq8_metrics.txt QUIET=true MAX_RECORDS_IN_RAM=2000000 ASSUME_SORTED=TRUE CREATE_INDEX=TRUE
 +</code>
 +
 +e intentar reparar lo que este mal. 
 +
 +==== Opciones extra ====
 +
 +=== lista de inclusion ===
 +
 +Digamos que de un pool de sujetos han fallado 2 o 3. No queremos tener que ejecutar el analisis para todos los sujetos, solo para los que han fallado. No queremos mover los sujetos que han fallado a un nuevo directorio pues atenta contra la organizacion del trabajo y el uso correcto del tiempo.
 +
 +Para esto existe la opcion //-cut// que indica al script que se analice exclusivamente los sujetos contenidos en un archivo de input.
 +
 +La forma correcta de utilizarlo es la siguiente. Ejemplo, si solo queremos que se ejecute el analisis en los sujetos //seq-8// y //seq-27//, hacemos el siguiente archivo,
 +
 +<code>
 +[osotolongo@brick03 WGS]$ cat /nas/osotolongo/wgs/only.txt
 +seq-8
 +seq-27
 +</code>
 +
 +y tras esto ejecutamos algo como,
 +
 +<code>
 +$ ./wgs.pl -cut /nas/osotolongo/wgs/only.txt -o /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE
 +</code>
 +
 +que hara todo el procedimiento pero solo para estos sujetos.
 +
 +=== debug ===
 +
 +Para ayudar en la localizacion de errores existe la opcion //-g//, para indicar que no se borren los archivos temporales. El comando, 
 +
 +<code>
 +$ ./wgs.pl -g -o /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE
 +</code>
 +
 +deja un subdirectorio //tmp// por cada sujeto con sus archivos temporales correspondientes. Ejemplo para seq-5, estos archivos estarian en // /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/ //.
genetica/wgs.txt · Last modified: 2020/08/04 10:58 (external edit)