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genetica:wgs

Whole Genome Sequencing

El objetivo es definir un procedimiento que procese un numero grande de secuencias WGS en el menor tiempo posible. Para ello,una vez definido el pipeline deberemos automatizar las tareas e integrarlas en el schedule manager del cluster (Como usar el cluster sin morir en el intento).

Nota: Aunque el script de ejecución final está integrado en el cluster de Fundació ACE, puede ser modificado fácilmente para integrarlo en cualquier otro cluster que use SLURM y probablemente pueda modificarse para otros schedule managers.

tl;dr

 ./wgs.pl -o <output_dir> [-cut <list.txt>] [-g] <input_dir>

Opciones:

  • <input_dir> : (Mandatory) Directorio donde se encuentran todas las secuencias. El script buscara los sujetos y sus archivos dentro de este directorio.
  • -o <output_dir> : (Opcional) Directorio donde se escribiran los resultados. En caso de obviarse se escribiran en el directorio desde el cual se lanza el script.
  • -cut <list.txt> : (Opcional) Dice al script que analice SOLO los sujetos incluidos en el archivo que se suministra <list.txt>. Este archivo debe ser una listasimple de los sujetos a analizar.
  • -g : Indica que no se borren los archivos temporales. Por defecto se borran, a no ser que se ponga este switch.

Pipeline

Primeramente hemos de definir el pipeline que se correra dentro del cluster. Aqui se ha de tener cuidado porque todas las herramientas y archivos han de ser accesibles desde cualquier nodo. En aras del siguiente paso podemos dividir el proceso en varios trozos. Tomemos por ejemplo el sujeto seq-5. Aqui los pasos son,

/nas/usr/local/bin/bwa mem -t 4 -R "@RG\tID:V300016291_L01_549\tSM:seq5\tPL:BGI\tPI:380" -M /the_dysk/BGI_exome/reference/Homo_sapiens_assembly38 /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE/seq-5/V300016291_L01_549_1.fq.gz /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE/seq-5/V300016291_L01_549_2.fq.gz > /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_0.sam
 
/nas/usr/local/bin/bwa mem -t 4 -R "@RG\tID:V300016291_L01_550\tSM:seq5\tPL:BGI\tPI:380" -M /the_dysk/BGI_exome/reference/Homo_sapiens_assembly38 /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE/seq-5/V300016291_L01_550_1.fq.gz /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE/seq-5/V300016291_L01_550_2.fq.gz > /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_1.sam
 
/nas/usr/local/bin/bwa mem -t 4 -R "@RG\tID:V300016291_L01_551\tSM:seq5\tPL:BGI\tPI:380" -M /the_dysk/BGI_exome/reference/Homo_sapiens_assembly38 /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE/seq-5/V300016291_L01_551_1.fq.gz /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE/seq-5/V300016291_L01_551_2.fq.gz > /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_2.sam
 
/nas/usr/local/bin/bwa mem -t 4 -R "@RG\tID:V300016291_L01_552\tSM:seq5\tPL:BGI\tPI:380" -M /the_dysk/BGI_exome/reference/Homo_sapiens_assembly38 /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE/seq-5/V300016291_L01_552_1.fq.gz /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE/seq-5/V300016291_L01_552_2.fq.gz > /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_3.sam
 
java -Djava.io.tmpdir=/nas/osotolongo/tmp/ -Xmx8g -jar /nas/usr/local/bin/picard.jar MergeSamFiles I=/the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_0.sam I=/the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_1.sam I=/the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_2.sam I=/the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_3.sam  O=/the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5.sam
java -Djava.io.tmpdir=/nas/osotolongo/tmp/ -Xmx8g -jar /nas/usr/local/bin/picard.jar SortSam I=/the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5.sam O=/the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_sorted.bam SORT_ORDER=coordinate
/nas/software/samtools/bin/samtools index /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_sorted.bam
 
/nas/usr/local/bin/verifyBamID --vcf /the_dysk/BGI_exome/reference/hapmap_3.3.hg38.vcf.gz --bam /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_sorted.bam --chip-none --maxDepth 1000 --precise --verbose --ignoreRG --out /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/results/seq5_verifybam |& grep -v "Skipping marker"
 
java -Djava.io.tmpdir=/nas/osotolongo/tmp/ -Xmx8g -jar /nas/usr/local/bin/picard.jar ValidateSamFile IGNORE=MATE_NOT_FOUND IGNORE=MISSING_READ_GROUP IGNORE=RECORD_MISSING_READ_GROUP I=/the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_sorted.bam
java -Djava.io.tmpdir=/nas/osotolongo/tmp/ -Xmx8g -jar /nas/usr/local/bin/picard.jar MarkDuplicates I=/the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_sorted.bam O=/the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_GATKready.bam METRICS_FILE=/the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_metrics.txt QUIET=true MAX_RECORDS_IN_RAM=2000000 ASSUME_SORTED=TRUE CREATE_INDEX=TRUE
java -jar /nas/usr/local/opt/gatk3/GenomeAnalysisTK.jar -T DepthOfCoverage -R /the_dysk/BGI_exome/reference/Homo_sapiens_assembly38.fasta -nt 1 -ct 10 -ct 15 -ct 20 -ct 30 --omitDepthOutputAtEachBase --omitIntervalStatistics --omitLocusTable -L /the_dysk/BGI_exome/reference/MGI_Exome_Capture_V5_bis2.bed -I /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_GATKready.bam -o /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/results/seq5_exome_coverage
singularity run --cleanenv -B /nas:/nas -B /the_dysk:/the_dysk /usr/local/bin/gatk4.simg gatk --java-options "-DGATK_STACKTRACE_ON_USER_EXCEPTION=true -Xmx16G" BaseRecalibrator -I /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_GATKready.bam -R /the_dysk/BGI_exome/reference/Homo_sapiens_assembly38.fasta --known-sites /the_dysk/BGI_exome/reference/Mills_and_1000G_gold_standard.indels.hg38.vcf.gz --known-sites /the_dysk/BGI_exome/reference/dbsnp_146.hg38.vcf.gz --known-sites /the_dysk/BGI_exome/reference/1000G_phase1.snps.high_confidence.hg38.vcf.gz -O /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_recal_data.table1
singularity run --cleanenv -B /nas:/nas -B /the_dysk:/the_dysk /usr/local/bin/gatk4.simg gatk --java-options "-DGATK_STACKTRACE_ON_USER_EXCEPTION=true -Xmx16G" ApplyBQSR -R /the_dysk/BGI_exome/reference/Homo_sapiens_assembly38.fasta -I /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_GATKready.bam -bqsr-recal-file /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_recal_data.table1 -O /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/results/seq5_recal.bam
singularity run --cleanenv -B /nas:/nas -B /the_dysk:/the_dysk /usr/local/bin/gatk4.simg gatk --java-options "-DGATK_STACKTRACE_ON_USER_EXCEPTION=true -Xmx16G" AnalyzeCovariates -bqsr /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_recal_data.table1 --plots /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/results/seq5_AnalyzeCovariates.pdf
singularity run --cleanenv -B /nas:/nas -B /the_dysk:/the_dysk /usr/local/bin/gatk4.simg gatk --java-options "-DGATK_STACKTRACE_ON_USER_EXCEPTION=true -Xmx16G" BaseRecalibrator -I /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/results/seq5_recal.bam -R /the_dysk/BGI_exome/reference/Homo_sapiens_assembly38.fasta --known-sites /the_dysk/BGI_exome/reference/Mills_and_1000G_gold_standard.indels.hg38.vcf.gz --known-sites /the_dysk/BGI_exome/reference/dbsnp_146.hg38.vcf.gz --known-sites /the_dysk/BGI_exome/reference/1000G_phase1.snps.high_confidence.hg38.vcf.gz -O /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_recal_data.table2
singularity run --cleanenv -B /nas:/nas -B /the_dysk:/the_dysk /usr/local/bin/gatk4.simg gatk --java-options "-DGATK_STACKTRACE_ON_USER_EXCEPTION=true -Xmx16G" AnalyzeCovariates -before /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_recal_data.table1 -after /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/seq5_recal_data.table2 -plots /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/results/seq5_before-after-plots.pdf
singularity run --cleanenv -B /nas:/nas -B /the_dysk:/the_dysk /usr/local/bin/gatk4.simg gatk --java-options "-DGATK_STACKTRACE_ON_USER_EXCEPTION=true -Xmx16G" HaplotypeCaller -R /the_dysk/BGI_exome/reference/Homo_sapiens_assembly38.fasta -I /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/results/seq5_recal.bam -ERC GVCF --dbsnp /the_dysk/BGI_exome/reference/dbsnp_146.hg38.vcf.gz -O /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/results/seq5_raw.snps.indels.g.vcf.gz
singularity run --cleanenv -B /nas:/nas -B /the_dysk:/the_dysk /usr/local/bin/gatk4.simg gatk --java-options "-DGATK_STACKTRACE_ON_USER_EXCEPTION=true -Xmx16G -XX:+UseConcMarkSweepGC" VariantEval -R /the_dysk/BGI_exome/reference/Homo_sapiens_assembly38.fasta -L /the_dysk/BGI_exome/reference/MGI_Exome_Capture_V5_bis2.bed -D /the_dysk/BGI_exome/reference/dbsnp_146.hg38.vcf.gz -O /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/results/seq5_eval.gatkreport --eval /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/results/seq5_raw.snps.indels.g.vcf.gz

Este pipeline se ha dividido en varios bloques que dependen unos de otros. Los 4 primeros son independientes y se pueden correr en paralelo. El numero 5 depende de la terminacion de los 4 primeros. Los bloques 6 y 7 dependen del numero 5 pero pueden correrse independientemente.

Paralelizacion

El montaje correcto del pipeline permite la paralelizacioen del procediemiento dentro de cada secuenciacion, pero ademas, debe paralelizarse el procedimientp total. Es decir, cadda sujeto debe correr en paralelo a los demas. Para ello basta crear un sistema de dependencias como el que se muestra en la figura.

Entonces, una vez definido el pipeline, la secuencia de ejecucion de cada trozo y el modo de paralelizacion seria sencillo definir el flujo de ejecucion si supieramos que archivos iniciales debe cargar cada ejecucion inicial (los bwa).

Parsing

Lo primero que ddebemos saber es que el directorio de input esta compuesto por una lista de subdirectorios cada uno perteneciente a un sujeto distinto.

[osotolongo@detritus HUMehbE]$ pwd
/the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE
[osotolongo@detritus HUMehbE]$ ls
BGI_Data_List_F18FTSEUET0180_filled.pdf                    md5sum.check  seq-1   seq-11  seq-13  seq-15  seq-17  seq-19  seq-20  seq-22  seq-24  seq-26  seq-28  seq-4  seq-6  seq-8
BGI_Sequencing_Analysis_Report_F18FTSEUET0180_HUMehbE.pdf  md5sum.txt    seq-10  seq-12  seq-14  seq-16  seq-18  seq-2   seq-21  seq-23  seq-25  seq-27  seq-3   seq-5  seq-7  seq-9

Para cada sujeto hay una lista de ocho archivos que deben parearse segun el nombre de archivo.

[osotolongo@detritus HUMehbE]$ ls seq-5/
V300016291_L01_549_1.fq.gz  V300016291_L01_550_1.fq.gz  V300016291_L01_551_1.fq.gz  V300016291_L01_552_1.fq.gz
V300016291_L01_549_2.fq.gz  V300016291_L01_550_2.fq.gz  V300016291_L01_551_2.fq.gz  V300016291_L01_552_2.fq.gz

En este ejemplo deben parearse,

  • V300016291_L01_549_1.fq.gz y V300016291_L01_549_2.fq.gz
  • V300016291_L01_550_1.fq.gz y V300016291_L01_550_2.fq.gz
  • V300016291_L01_551_1.fq.gz y V300016291_L01_551_2.fq.gz
  • V300016291_L01_552_1.fq.gz y V300016291_L01_552_2.fq.gz

asi que la estructura a seguir es bastante clara. No obstante a que los nombres de archivo varian entre sujetos, siguen la misma estructura.

[osotolongo@detritus HUMehbE]$ ls seq-10
V300016281_L01_553_1.fq.gz  V300016281_L01_554_1.fq.gz  V300016281_L01_555_1.fq.gz  V300016281_L01_556_1.fq.gz
V300016281_L01_553_2.fq.gz  V300016281_L01_554_2.fq.gz  V300016281_L01_555_2.fq.gz  V300016281_L01_556_2.fq.gz

Lo que voy hacer entonces es definir un hash donde se guarda la informacion relativa a cada sujeto (incluidos los patrones en los archivos originales) y a partir de ahi construir los scripts.

Veamos, primero leo el input dir

my $src_dir = shift;
$src_dir =~ s/\/$//;
my $find_rule = File::Find::Rule->new;
my @ppaths = $find_rule->maxdepth(1)->directory->in($src_dir);
@ppaths = grep {!/$src_dir$/} @ppaths;
my %ltpaths = map { /.*\/(.*)?$/ => $_ } @ppaths;
my %finfo;
my %lpaths;

luego, en dependencia de las opciones puedo reducir la lista o no,

if($cfile && -e $cfile && -f $cfile){
        my @cuts = read_file $cfile;
        chomp @cuts;
        foreach my $cut (@cuts){
                if(grep {/$cut/} %ltpaths){
                        $lpaths{$cut} = $ltpaths{$cut};
                }
        }
}else{
        %lpaths = %ltpaths;
}

y ahora lleno el hash de datos,

foreach my $pollo (sort keys %lpaths){
        opendir PD, $lpaths{$pollo} or next;
        my @fqs = grep { !/^\./} readdir PD;
        #$finfo{$pollo}{'name'} = $pollo;
        $finfo{$pollo}{'path'} = $lpaths{$pollo};
        foreach my $fq (@fqs) {
                $_=$fq;
                my @ids  = /^V(\d*?)\_L(\d*?)\_(\d*?)\_\d\.fq\.gz$/;
                $finfo{$pollo}{'fq_name'} = 'V'.$ids[0].'_L'.$ids[1];
                push @{ $finfo{$pollo}{'fq_list'} }, $ids[2];
        }
}

Programatic tree

Ya casi esta, ahora por cada sujeto guardado pueden definirse los primeros 4 procesos,

El numero 5 se hace que dependa de estos 4,

El 6 y el 7 dependen del 5,

y por ultimo, hay un proceso que depende de que terminen todos los demas (TODOS) y lo que hace es limpiar los archivos temporales y enviar un email de finalizacion,

La magia completa aqui, en menos de 200 lineas


8-)

Ejecucion

La forma correcta de ejecutar el script es,

$ ./wgs.pl -o /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE/

La opción -o indica al script donde guardar los resultados, en este caso en /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS . Los datos se leeran desde /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE/ ,

La opcion -o no es obligatoria. En caso de no suministrar un directorio de salida, esta se escribira en el directorio actual desde donde se ejeuta el script.

Los resultados se escriben en el directorio de salida, haciendo un subdirectorio para cada sujeto analizado y siguiendo las mismas convenciones del input,

[osotolongo@brick03 WGS]$ ls /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS
seq-1	seq-11	seq-13	seq-15	seq-17	seq-19	seq-20	seq-22	seq-24	seq-26	seq-28	seq-4  seq-6  seq-8  slurm
seq-10	seq-12	seq-14	seq-16	seq-18	seq-2	seq-21	seq-23	seq-25	seq-27	seq-3	seq-5  seq-7  seq-9

Dentro de cada sujeto se crea u n directorio results con los resultados del analisis,

[osotolongo@brick03 WGS]$ tree seq-1
seq-1
└── results
    ├── seq1_AnalyzeCovariates.pdf
    ├── seq1_before-after-plots.pdf
    ├── seq1_eval.gatkreport
    ├── seq1_exome_coverage.sample_statistics
    ├── seq1_exome_coverage.sample_summary
    ├── seq1_metrics.txt
    ├── seq1_raw.snps.indels.g.vcf.gz
    ├── seq1_raw.snps.indels.g.vcf.gz.tbi
    ├── seq1_recal.bai
    ├── seq1_recal.bam
    ├── seq1_recal_data.table1
    ├── seq1_recal_data.table2
    ├── seq1_verifybam.depthSM
    ├── seq1_verifybam.log
    └── seq1_verifybam.selfSM
 
1 directory, 15 files

trick

Esta estructura permitiria ejecutar,

$ ./wgs.pl -o /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE

y en caso de no tener problemas con los permisos, los resultados quedarian en un directorio dentro del mismo sujeto de proyecto. No se ha hecho asi por defecto previendo precisamente los problemas de permisos.


Troubleshooting

Pueden ocurrir multitud de problemas en la ejecucion del script. Afortunadamente un fallo en uno de las tareas afecta solamente al sujeto individual sobre el que se realiza la tarea. El resto de sujetos se procesara correctamente.

Al ocurrir un fallo en algun script, el sistema enviara un email informando del fallo y el jobid asociado. Toda la informacion ira en el subject del email.

ejemplo 1

Aqui se informa que la tarea con jobid = 154540 ha fallado. Tambien sabemos que esta relacionada con el sujeto seq-27.

SLURM Job_id=154540 Name=sam_seq-27 Failed, Run time 00:28:28, FAILED, ExitCode 1

Ahora, dentro del directorio de output se crea un directorio llamado slurm donde se guardan todos los logs de ejecucion de las tareas. Hemos de buscar este fallo en particular por el jobid,

[osotolongo@brick03 WGS]$ ls slurm/ | grep 154540
bwa_seq-27-154540

una vez localizado el log correcto podeos buscar el error manualmente,

[osotolongo@brick03 WGS]$ less slurm/bwa_seq-27-154540

o simplemente hacer algun grep,

[osotolongo@brick03 WGS]$ grep -i error slurm/bwa_seq-27-154540
[gzread] Input/output error

Como informacion adicional, en el directorio slurm tambien se guardan los scripts a ejecutar para cada parte del proceso,

[osotolongo@brick03 WGS]$ ls slurm/ | grep seq-27 | grep sh
bwa_seq-27_0.sh
bwa_seq-27_1.sh
bwa_seq-27_2.sh
bwa_seq-27_3.sh
merge_seq-27.sh
validate_seq-27.sh
verify_seq-27.sh

El nombre del log nos dice que ha fallado alguno de los bwa. En caso de querer depurar mas lo que ha pasado podemos leer el log y encontrar cual de los comandos ha fallado exactamente.

ejemplo 2

Algo menos basico, recibimos un email con subject,

SLURM Job_id=154595 Name=validate_seq-8 Failed, Run time 01:01:18, FAILED, ExitCode 2

y buscamos el log correspondiente,

[osotolongo@brick03 WGS]$ ls slurm/ | grep 154595
validate_seq-8-154595

Aqui si hacemos,

[osotolongo@brick03 WGS]$ grep -i error slurm/validate_seq-8-154595

obtenemos un monton de informacion ya que el error ocurrio a un nivel y todos los niveles posteriores arrojan errores. Asi que no hay mas remediio que leerse el log con calma, y vemos que mientras se hace MarkDuplicates tenemos un error de Java,

Exception in thread "main" picard.PicardException: Exception writing ReadEnds to file.
        at picard.sam.markduplicates.util.ReadEndsForMarkDuplicatesCodec.decode(ReadEndsForMarkDuplicatesCodec.java:110)
        at picard.sam.markduplicates.util.ReadEndsForMarkDuplicatesCodec.decode(ReadEndsForMarkDuplicatesCodec.java:32)
        at htsjdk.samtools.util.SortingCollection$FileRecordIterator.advance(SortingCollection.java:630)
        at htsjdk.samtools.util.SortingCollection$FileRecordIterator.next(SortingCollection.java:620)
        at htsjdk.samtools.util.PeekIterator.peek(PeekIterator.java:69)
        at htsjdk.samtools.util.SortingCollection$PeekFileRecordIteratorComparator.compare(SortingCollection.java:655)
        at htsjdk.samtools.util.SortingCollection$PeekFileRecordIteratorComparator.compare(SortingCollection.java:652)
        at java.util.TreeMap.compare(TreeMap.java:1295)
        at java.util.TreeMap.put(TreeMap.java:538)
        at java.util.TreeSet.add(TreeSet.java:255)
        at htsjdk.samtools.util.SortingCollection$MergingIterator.next(SortingCollection.java:566)
        at picard.sam.markduplicates.MarkDuplicates.generateDuplicateIndexes(MarkDuplicates.java:729)
        at picard.sam.markduplicates.MarkDuplicates.doWork(MarkDuplicates.java:259)
        at picard.cmdline.CommandLineProgram.instanceMain(CommandLineProgram.java:305)
        at picard.cmdline.PicardCommandLine.instanceMain(PicardCommandLine.java:103)
        at picard.cmdline.PicardCommandLine.main(PicardCommandLine.java:113)
Caused by: java.io.IOException: failed to read chunk
        at org.xerial.snappy.SnappyInputStream.hasNextChunk(SnappyInputStream.java:433)
        at org.xerial.snappy.SnappyInputStream.read(SnappyInputStream.java:167)
        at java.io.DataInputStream.readFully(DataInputStream.java:195)
        at java.io.DataInputStream.readLong(DataInputStream.java:416)
        at picard.sam.markduplicates.util.ReadEndsForMarkDuplicatesCodec.decode(ReadEndsForMarkDuplicatesCodec.java:92)
        ... 15 more

Este error desencadena todos los demas errores.

Dado que sabemos que este log corresponde al script validate_seq-8.sh podemos encontrar rapidamente el comando culpable del error,

[osotolongo@brick03 WGS]$ grep MarkDuplicates slurm/validate_seq-8.sh
java -Djava.io.tmpdir=/nas/osotolongo/tmp/ -Xmx8g -jar /nas/usr/local/bin/picard.jar MarkDuplicates I=/the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-8/tmp/seq8_sorted.bam O=/the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-8/tmp/seq8_GATKready.bam METRICS_FILE=/the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-8/tmp/seq8_metrics.txt QUIET=true MAX_RECORDS_IN_RAM=2000000 ASSUME_SORTED=TRUE CREATE_INDEX=TRUE

e intentar reparar lo que este mal.

Opciones extra

lista de inclusion

Digamos que de un pool de sujetos han fallado 2 o 3. No queremos tener que ejecutar el analisis para todos los sujetos, solo para los que han fallado. No queremos mover los sujetos que han fallado a un nuevo directorio pues atenta contra la organizacion del trabajo y el uso correcto del tiempo.

Para esto existe la opcion -cut que indica al script que se analice exclusivamente los sujetos contenidos en un archivo de input.

La forma correcta de utilizarlo es la siguiente. Ejemplo, si solo queremos que se ejecute el analisis en los sujetos seq-8 y seq-27, hacemos el siguiente archivo,

[osotolongo@brick03 WGS]$ cat /nas/osotolongo/wgs/only.txt
seq-8
seq-27

y tras esto ejecutamos algo como,

$ ./wgs.pl -cut /nas/osotolongo/wgs/only.txt -o /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE

que hara todo el procedimiento pero solo para estos sujetos.

debug

Para ayudar en la localizacion de errores existe la opcion -g, para indicar que no se borren los archivos temporales. El comando,

$ ./wgs.pl -g -o /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/HUMehbE

deja un subdirectorio tmp por cada sujeto con sus archivos temporales correspondientes. Ejemplo para seq-5, estos archivos estarian en /the_dysk/BGI_exome/F18FTSEUET0180/WGS/seq-5/tmp/ .

genetica/wgs.txt · Last modified: 2020/08/04 10:58 (external edit)